Be­kannt­ma­chung des Paul-Ehr­lich-In­sti­tuts über die An­for­de­run­gen an die dia­gno­s­ti­sche Er­pro­bung von Nu­kle­in­säu­re-Am­pli­fi­ka­ti­ons­tech­ni­ken zum Nach­weis, zur Be­stä­ti­gung und zur quan­ti­ta­ti­ven Be­stim­mung von Mar­kern von HIV-In­fek­tio­nen (HIV 1 und HIV 2) so­wie von He­pa­ti­tis B und C in Pro­ben mensch­li­chen Ur­sprungs (vom 27.Ok­to­ber 2000)

Die "Verordnung zur Ausdehnung der Vorschriften über die Zulassung und staatliche Chargenprüfung auf Tests zur In-vitro-Diagnostik nach dem Arzneimittelgesetz (In-vitro-Diagnostika-Verordnung nach dem Arzneimittelgesetz - IVD-AMG-V) vom 24. Mai 2000" (BGBl. I, S. 746) regelt in § 3 Ziff. 2. für Nukleinsäureamplifikationstests oder techniken (NAT), dass deren Zulassungsunterlagen innerhalb von sechs Monate nach Bekanntgabe der entsprechenden Anforderungen im Bundesanzeiger beim Paul-Ehrlich-Institut nachgereicht werden müssen.

Nachfolgend sind die Anforderungen an die diagnostische Erprobung von Nukleinsäureamplifikationstechniken (NAT) zum Nachweis, zur Bestätigung und zur quantitativen Bestimmung von Markern von HIV-Infektionen (HIV1 und HIV2) sowie von Hepatitis B und C in Proben menschlichen Ursprungs aufgelistet.

• Alle diagnostischen Erprobungen sollen in direktem Vergleich mit einem nach dem Arzneimittelgesetz zugelassenen oder einem nach der In-vitro-Diagnostika-Richtlinie mit der CE-Konformitätskennzeichnung versehenenTest durchgeführt werden.
  

• Im Rahmen der diagnostischen Erprobung auftretende diskrepante Testergebnisse sollen weitestmöglich abgeklärt werden, z.B.:
  

  durch Untersuchung in weiteren NAT-Systemen (z.B. andere Primer),
  

  durch Anwendung einer alternativen Methode (z.B. Serologie) und/oder Abklärung weiterer Marker,
  

  durch Überprüfung des klinischen Status und Diagnose des Patienten und
  

  durch Untersuchung von Folgeproben.
  

• NAT-Tests, die zum Screening, z.B. von Blutspenden, und solche, die für die Diagnostik von Infektionen entwickelt wurden, sollen hinsichtlich Sensitivität und Spezifität die gleichen Anforderungen erfüllen.
  
• Die diagnostische Erprobung soll an einer Population, die der deutschen entspricht (Prävalenz, Geno-/Subtypverteilung etc.), durchgeführt werden.
  
• NAT-Tests zum Screening von Blutspenden sollen alle positiven Proben identifizieren. Die diagnostische Testsensitivität soll für die frühe Infektionsphase (Präserokonversion) dem Stand von Wissenschaft und Technik entsprechen.
  
• Die für die diagnostische Erprobung eingesetzten positiven Proben sollen so ausgewählt werden, dass sie verschiedene Phasen der entsprechenden Erkrankung(en), unterschiedliche Antikörperspektren, unterschiedliche Geno-/Subtypen etc. widerspiegeln.
  

• Der Nachweis von Geno-/Subtypen soll durch
  

  geeignetes Primer- bzw. Sondendesign gewährleistet und
  

  durch Untersuchung charakterisierter Geno-/Subtyp-Proben bzw. -panel validiert werden.
  

• Die analytische Sensitivität (Nachweisgrenze) soll durch den "95% Grenzwert" angegeben werden. Dies ist die Konzentration des Analyten, bei der 95% der Testläufe mit seriellen Verdünnungen eines internationalen Referenzpräparates, z.B. des WHO-Standards oder eines daran kalibrierten Referenzmaterials, ein positives Ergebnis zeigen.
  
• Die Ergebnisdarstellung quantitativer NAT-Tests soll sich an internationalen Referenzpräparaten, z.B. WHO-Standards oder kalibrierten Referenzmaterialien, orientieren und entsprechend, z.B. in Internationalen Einheiten pro Milliliter (IU/ml), angegeben werden.
  
• NAT-Assays sollen die Viren auch in Antikörper-freien Proben nachweisen können, z.B. in Proben aus der Präserokonversionsphase. Viren als Bestandteile von Immunkomplexen können sich im Vergleich zu "freien" Viren unterschiedlich verhalten, z.B. bei Anreicherungsschritten mittels Zentrifugation. Daher sollen Robustheitsstudien auch mit Antikörper-negativen Proben durchgeführt werden.
  
• Die in der diagnostischen Erprobung eingesetzten negativen Proben sollen die Zielpopulation widerspiegeln, für die der Test ausgelegt ist.
  
• Für die diagnostische Erprobung der Spezifität von NAT-Screeningtests sollen Blutspendepopulationen von mindestens zwei Spendezentren und bestehend aus fortlaufenden Blutspenden, einschließlich Erstspendern, untersucht werden.
  
• Die diagnostische Erprobung soll den Einfluss von potentiell die NAT hemmenden Agenzien/Substanzen untersuchen.
  
• Entsprechend dem Stand von Wissenschaft und Technik sollten NAT-Tests eine Funktionskontrolle für jede Testprobe (interne Kontrolle) beinhalten. Diese Kontrolle soll durch den gesamten Prozeß (Extraktion, Amplifikation, Nachweisreaktion) mitgeführt werden.
  
• Sind NAT-Tests durch den Hersteller spezifiziert für die Verwendung von sowohl Serum als auch Plasma, soll im Rahmen der diagnostischen Erprobung vergleichend die entsprechende Eignung gezeigt werden.
• Sind NAT-Tests durch den Hersteller für die Untersuchung von Plasma vorgesehen, soll die diagnostische Erprobung alle Anti-Koagulanzien miteinbeziehen, die der Hersteller für den Einsatz seiner Methode nicht ausschliesst.
  
• NAT-Tests, die zur Untersuchung von anderen Körperflüssigkeiten als Serum oder Plasma, z.B. von Urin oder Speichel bestimmt sind, sollen die gleichen Anforderungen hinsichtlich der Sensitivität und Spezifität wie Serum/Plasma-Tests erfüllen. Die diagnostische Erprobung soll die verschiedenen Körperflüssigkeiten von einzelnen Personen sowohl in dem neu zu bewertenden Test als auch in einem entsprechenden mit Plasma/Serum arbeitenden Test vergleichend untersuchen.
  
• Robustheitsstudien sollen Untersuchungen zur potentiellen Kreuzkontamination enthalten. Dazu sollen mindestens fünf Läufe mit alternierenden hoch-positiven und -negativen Proben durchgeführt werden. Die hoch-positiven Proben sollen natürlich auftretende hohe Virustiter widerspiegeln.
• Die Systemfehlerrate, die zu falsch-negativen Ergebnissen führen kann, soll durch die Untersuchung von niedrig-positiven Proben untersucht werden. Die niedrig-positiven Proben sollen eine Viruskonzentration enthalten, die etwa dem dreifachen des "95% Grenzwertes" entspricht.

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